細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則，各項操作要保證規(guī)范、科學(xué)，不對細(xì)胞的生長造成額外的影響。這其中最常見的問題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對細(xì)胞生長狀態(tài)的影響。 細(xì)胞接種培養(yǎng)板，細(xì)胞總是聚集在周邊部分，該如何處理??？
請問你的細(xì)胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板？如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細(xì)胞中間少，四周多！
這里提供一個好辦法：在培養(yǎng)種板之前，把細(xì)胞培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個小時的飽和后再取出，種入細(xì)胞時力量要輕，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中，培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩，否則你的細(xì)胞就會想你說得那樣聚積在一起。
培養(yǎng)板孔直徑愈小，這個現(xiàn)象越明顯，24、96孔板這種現(xiàn)象不可避免，因為液體的附壁使得孔內(nèi)培養(yǎng)液不是成一個液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預(yù)等原因而不能加足量培養(yǎng)液，使得細(xì)胞隨培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象，如果為了使孔中央也有均勻細(xì)胞而增加接種細(xì)胞數(shù)量的話，這要看你需要觀察何種指標(biāo)，如果是MTT ，免疫組化的話會因為細(xì)胞成層而影響結(jié)果。
細(xì)胞培養(yǎng)板消化細(xì)胞時要注意吹打均勻，避免細(xì)胞成團(tuán)，而且孔內(nèi)培養(yǎng)液量要足夠，一般接種時加足量培養(yǎng)液，加干預(yù)時換一次液，干預(yù)液加培養(yǎng)液量等于接種時培養(yǎng)液量，這樣的話“邊集”現(xiàn)象會有所改觀，不妨一試。
