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微生物鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
  • 發(fā)布日期:2017-12-29      瀏覽次數(shù):2868
    • 目的 :

      建立微生物鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,使其規(guī)范化、合理化

      范圍

      環(huán)境監(jiān)測、生產(chǎn)設(shè)備、藥品進廠原料及成品微生物檢測和水質(zhì)檢測過程中分離得到的微生物及工作菌株。

      職責(zé):

      1、 質(zhì)量控制部檢驗人員對具體操作負責(zé);

      2 、質(zhì)量保證部負責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的執(zhí)行。 

      內(nèi)容 :

      1、概述 
      微生物是對藥品原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品造成污染的重要因素,也是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格、直接或間接對人類造成危害的重要因素。因此,對從藥品原料、生產(chǎn)環(huán)境、檢測環(huán)境、設(shè)備和成品微生物檢測過程中分離得到的污染微生物進行鑒定,是十分必要的,也可為檢驗和生產(chǎn)提供有效的依據(jù)。微生物鑒定應(yīng)遵循逐步縮小的原則,用細菌分類學(xué)的知識和操作步驟,逐步將未知微生物落實到科、屬、種。 

      2 、菌株采集 
      從藥品原料、成品檢驗、環(huán)境監(jiān)測和水質(zhì)檢測過程中,采集菌株。 

      3 、菌株純化 
      無菌操作用接種環(huán)挑取待鑒定菌落或少許含菌液到相應(yīng)的培養(yǎng)基上劃線分離,純化培養(yǎng)。

      4 、鑒定程序

      培養(yǎng)特征 :菌落形態(tài),如形狀、大小、色澤、隆起、表面狀況、質(zhì)地、光澤、水溶性色素等。

      細胞形態(tài):在顯微鏡下,仔細觀察細胞形態(tài) 

      形狀:如球狀、桿狀、螺旋狀、弧狀、絲狀及特殊形狀。

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      排列:單個、成對、成鏈或其他特殊的排列方式。

      特殊的細胞結(jié)構(gòu) 
      鞭毛:有無鞭毛、著生位置及其數(shù)量。 

      芽孢:有無芽孢、形狀、著生位置、孢囊是否膨大。

      孢子:孢子形狀、著生位置、數(shù)量及排列。

      運動性:鞭毛泳動、滑動、螺旋體運動方式。 

      革蘭氏染色反應(yīng):呈陽性或陰性

      革蘭氏染色試驗 

      原理:革蘭氏陽性細菌的細胞壁較厚,細胞壁中的肽聚糖含量高且網(wǎng)格結(jié)構(gòu)緊密,含脂量又低,當(dāng)用結(jié)晶紫復(fù)合溶液染色細胞后用脫色劑脫色時,引起了細胞壁肽聚糖層風(fēng)狀結(jié)構(gòu)的孔徑縮小以至關(guān)閉,阻止了結(jié)晶紫-碘復(fù)合物的逸出,故菌體呈現(xiàn)深紫色;革蘭氏陰性細菌呈現(xiàn)復(fù)染液的紅色。 

      操作:在潔凈的載玻片上滴一滴蒸餾水或生理鹽水,用接種環(huán)挑取少量菌齡為培養(yǎng)18~24小時的菌苔,涂片經(jīng)火焰固定,加結(jié)晶紫染液染1分鐘,水洗干凈;滴加革蘭氏碘液復(fù)染1分鐘,水洗,瀝干;滴加95%乙醇脫色,約20~30秒,不時搖動玻片至無紫色為止,水洗;滴加番紅染液復(fù)染1~2分鐘,水洗,待干。油鏡檢查。 

      陽性-陰性對照控制:取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌懸液,制成涂片,分別染色操作后作為革蘭氏陽性和陰性的對照控制。 
      結(jié)果判斷:菌體呈藍紫色為革蘭氏陽性菌;菌體呈紅色為革蘭氏陰性菌。

      在以下情況必須進行微生物鑒定

      新購進標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)傳代菌株。

      產(chǎn)品檢驗結(jié)果超標(biāo)或出現(xiàn)異常。 

      控制菌檢查出現(xiàn)異常時,如有菌生長,不管是否典型菌生長,均需鑒定。

      水質(zhì)檢驗時,微生物檢測結(jié)果超過行動限。

      環(huán)境監(jiān)測時,微生物檢測結(jié)果超過行動限。

    魏經(jīng)理
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